1 / 28

Onkocytogenetika

Onkocytogenetika. Cytogenetická laboratoř OLG FN Brno. Historie nádorové cytogenetiky. 1914 - Boveri: chromozomová teorie vzniku nádorů nádorové buňky vznikají z původně normálních buněk, abnormální chování je zakotveno uvnitř buňky, ne v jejím okolí

donelle
Download Presentation

Onkocytogenetika

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Onkocytogenetika Cytogenetická laboratoř OLG FN Brno

  2. Historie nádorové cytogenetiky 1914 - Boveri: chromozomová teorie vzniku nádorů nádorové buňky vznikají z původně normálních buněk, abnormální chování je zakotveno uvnitř buňky, ne v jejím okolí nádorové buňky mají abnormální obsah chromatinu, každý nádor je založen jednou, jedinou buňkou

  3. První cytogenetický nález 1962 - Ph chromosom CML 1972 - nalezena reciproká translokace t(9;22) princip: vznik fuzního genu (bcr/abl) produkce nádorového proteinu ( chimerický protein) t(9;22)(q34;q11) 95% CML 2% AML 25-30% ALL

  4. Současné hypotézy nádorové transformace Příčina: ztráta regulace buněčné proliferace, nesmrtelnost (inaktivace TU supresorů nebo buněčných inhibitorů, aktivace onkogenů) mechanismus: mutace, delece, poziční efekt diploidní buňka - omezený počet dělení, zkracování telomer transformovaná - neomezený růst a dělení

  5. Telomery Nukleoproteinové konce chromozomů tandemově opakující se motiv TTAGGG (všichni savci, některé rostliny) význam: stabilita CH, ochrana před degradací a slepováním konců zkracování CH:replikace DNA na 3´konci neprobíhá prim. replikačním systémem  zkrácení CHzastavení b.cyklu telomeráza: ribonukleoproteinový enzym, doplňování telomer, syntéza telomerové DNA reverzní transkripcí vlastní mol. RNA aktivita telomerázy potlačena v diferencovaných bb.omezená životnost (replikační kapacita) zárodečné tk., nediferencované bb., nádorové bb.: aktivita telomerázy vysoká nesmrtelnost tumorový marker

  6. Používané cytogenetické metody Klasická cytogenetika: G-pruhy FISH: všechny typy sond CGH:detekce delecí a amplifikací M-FISH: MetaSystems, Lucia SKY: spektrální karyotypování M-bandy microarrays - genové sondy, podskupiny chorob s různou léčebnou odpovědí

  7. Význam cytogenetických vyšetření Součást diagnostiky: vyšetř. hematologické, histologické, imunofenotypizační, cytogenetické event. molekulárně genetické cytogenetické výsledky přispívají: • ke stanovení prognozy • k volbě léčebného postupu • monitorování průběhu onemocnění • sledování minimální residuální choroby

  8. Hematoonkologickáonemocnění Charakter klonální - postihují kmenové krvetvorné buňky rozdělení: leukemie (difuzní) lymfomy (ložiskovitá) etiologie multifaktoriální mutace v 1 hemopoetické buňceneoplastická proliferaceklon myeloblastické leukemie - mutace v multipotentní kmenové b. se schopností diferenciace do linie: erytroidní, granulocytární, monocytární, megakaryocytární lymfoblastické leukemie - prekurzor s diferenciací do T nebo B leukemie bifenotypické- diferenciace do obou řad akutní- týdny až měsíce chronické - měsíce až roky

  9. Klinické projevy leukemií důsledkem proliferace leukemických buněk a jejich infiltrace do tkání, narušení funkce orgánů Vysoké nároky na metabolismus infiltrace kostní dřeně  anemie, neutropenie trombocytopenie projevy onemocnění: únava, infekce horních cest dýchacích nereagující na standartní antibiotickou léčbu, zvýšené teploty, krvácivé projevy kožní a slizniční, petechie, krvácení z nosu a dásní, bolesti kloubů, vysoké teploty Diagnoza AL:morfologicky, imunohistochemicky, histologicky, cytogeneticky, mol. gen.

  10. Význam cytogenetickýchvyšetření uleukémií Cytogenetické výsledky přispívají: ke stanovení prognozy, k volbě léčebného postupu, k hodnocení léčebné odpovědi, k monitorování průběhu onemocnění AML potvrzen vztah mezi CHA, podtypem AML a prognozou CH změny klonálního charakteru u 60 - 90% nemocných Dobrá prognoza: t(15;17)(q22;12) 99% AML M3 promyelocytární PML/RARa-podporuje účinek kys.-trans-retinové změna prognozy na nejlepší, 90% kompl. remisí t(8;21)(q22;q22) - 40% AML M2 inv(16)(p13q22) - AML M4 eo, t(16;16)(p13;q22), del(16)(q22) Špatná prognoza: tMLL(11q23) s různými CH 10-20%AML aberace: -5/5q-, -7/7q-, 3q, komplexní karyotypy

  11. Myeloblastické leukemie Poruchy vyzrávání buněk myeloidní řady více než 20% blastů v KD výrazná převaha erytroidní proliferace Blasty - nezralé buňky obsahující granula Chromozomové změny korelují s podtypem prognosticky významné cytogenetická remise

  12. Akutní myeloidní leukemie Frekvence vzniku nových onemocnění: 4/100 000/rok převaha u dospělých Charakteristika: akumulace nezralých nonlymfoblastických bb v: kostní dřeni, periferní krvi, ostatních tkáních Důvod: 1. Zvýšená proliferační aktivita, blokáda vyzrávání, narušení norm. diferenciace myeloidních buněk 2. Redukce apoptozy FAB klasifikace: AML skup. M0 - M7 podle převládající diferenciace a stupně vyzrávání

  13. Myeloproliferativní syndrom MPD CML, polycytemia vera, esenciální trombocytemie, myelofibroza patologická transformace pluripotentní buňky  diferenciace v řadu granulocytární, erytroidní, megakaryocytární konečné stadium - blastická fáze ( akutní sekundární leukemie ) CML nadprodukce granulocytů a megakaryocytů v KD vznik nových CML 1/ 100 000 / rok I. Chronická fáze - až 3 roky, II. akcelerace, III. blastická krize II. a III. zvýš. počet nezralých bb v KD a PK, progresivní anemie a trombocytopenie t(9;22) = Ph = bcr/abl sekund.: +8, i(17q), +19 méně časté: +21,-Y,-7,-17, +17 !! 5-10% bez Ph s bcr/abl, horší prognoza, odlišné klin. příznaky, +8,-7, i(17q),+17

  14. Polycytemia vera (PV) Charakteristika: zvýšená produkce červených krvinek-poruchy cirkulace, trombotické stavy cyto: 20q-, +8, +9, 1q+, 13q-, t(X;1) Esenciální trombocytémie)(ET) zvýšení trombocytů, červených krvinek, deficience Fe prognoza nezávislá na přít. CHA cyto: t(9;22), +9, -7, +8, 13q-, 20q-, přestavby 1 Idiopatická myelofibroza (IMF) zmnožení vayiva v KD na úkor krvetvorné tkáně,snížená tvorba červených+bílých krvinek 10-15% riziko AML cyto:-7, +8, +9, aberace 1q, 5q, 13q, 20q

  15. Myelodysplastický syndrom (MDS) Dysfunkce KD, heterogenní skupina-dysplastická hematopoeza ve 2 a více buněčných liniích, kompletní ztráta kontroly proliferace a diferenciace hemopoetické buňky klinický obraz: periferní pancytopenie 20-40% přechod do AML 1/3 pacientů umírá na dysfunkci kostní dřeně bez vývoje AML 1/3 " “ na jiné příčiny hematologické nálezy: anemie, leukopenie, granulocytopenie, trombocytopenie I. Refrakterní anemie RA s prstenčitými sideroblasty s excesem blastů RAEB v transformaci RAEBt II. chronická myelomonocytární leukemie CMML

  16. MDS - chromozomální změny Strukturní: 5q31 tumorový supresor del 5q ( terminální, intersticiální) prognoza ! del 7q, del 20q Numerické: -5, -7, +8, +9, +19, +21, -X, -Y CMML počet blastů 5 - 20% cyto: -7, +8, -Y Sekundární MDS důsledek terapie jiný ch maligních onemocnění cyto: -7, del 5q, -5, del 7q, +8, -12, t(1;7), der(3p), der(6p), der(12p),der(17p), der(21q)

  17. Lymfoidní malignity Chromozomové změny - prognostický faktor u ALL korelují s podtypem definovaným morfologicky a imunologicky detekce u 70 - 95 % případů ALL 70% dětských ALL dosahuje kompletní remise !!!! lymfocyty produkovány: lymf. uzlinami, slezinou, thymem, KD primární lymfopoetické org.: thymus, KD sekundární: l. uzliny, l. tkáně střeva, slezina největší masa lymfopoetické tkáně v KD, zdrojem kmenové bb. Plasmatické bb.: konečné st. vývoje B lymfocytů

  18. Akutní lymfoblastická leukemie - ALL Akumulace maligních nezralých lymfoidních buněk v KD, často i v periferní krvi výskyt: nová onemocnění 3/100 000/rok častěji děti 3-5let, dospělí pod 30 let FAB klasifikace ( cytomorfologicky) L1 - L3 cytogenetika: numerické zmeny:hyperdiploidie 51-60 dobrá prognoza 47-50 střední trisomie 18, 21, X, 4, 6, 10, 14, 17, 20 hypodiploidie špatná progn., 8%dospělých 5%dětí monosomie 20

  19. Strukturní změny u T-ALL t(9;22) velmi špatná progn., 17-30% dosp., 2-6%dětí přestavby v oblasti minor t(1;19)(q23;p13) ; fuzní gen E2A/PBX1, příznivá progn. dlouhodobá kompl. remise po intenzivní chemoterapii t(4;11) MLL/AF4 velmi nepříznivá progn., 50% kojenců 2% dosp., 5%dětí všechny přestavby 11q23 (MLL) velmi špatná progn. t(12;21) TEL/AML1 30% dětí, dospělí vzácně, rychlá remise, dobrá progn. detekce FISH B-ALL: 25-30% norm. karyotyp, změny postihují 1 z T-buněč. receptorů TCR , ( 14q11), TCR(7p15), TCR (7q35) detekce mol. gen., t(8;14) u T i B-ALL stejná cyto: del 6q, 9p, 12p

  20. Chronická lymfatická leukemie CLL % změn variabilní, závislost na použité technice +12 (15%) samostatná změna, jen B-lymfocyty, pokročilé st. nepříznivá progn. del(13)(q14) gen RB1 tumor-supresor, dobrá progn. (samost.) del p53 17p13 tumor-supresor, špatná progn., kratší přežití, B-CLL nezávislý faktor přestavby 11q B-CLL: nízká proliferační aktivita používané metody FISH a CGH

  21. Solidní nádory dětského věku Spolupráce s Odd. dětské onkologie FN Brno vyšetřovaný materiál: kostní dřeň otisky tumorů parafinové bločky kultivovaná tkáň TU

  22. Nejčastější typy nádorů Materiál z KDO FN Brno Neuroblastom rhabdomyosarkom (RMS) lymfomy ( HL, NHL) Ewing. sarkom

  23. Neuroblastom Nálezy: Nmyc amplifikace 2p24 (10% TU) del(1)(p36) zmnožení 17q (gain 17) dobrá prognoza polyploidie: 3n, 5n, 6n aneuploidie: zmnožení 6, 7, 17 nebo ztráta 11,14, X - špatná prognoza 2n, 4n, del 1p36, del 11q, dup 17q21-qter

  24. Rhabdomyosarkom RMS RMS 5-8% dětských malignit: embryonální E-RMS x alveolární A-RMS A-RMS t(2;13)(q35;q14) t(1;13)(p36;q14) E-RMS: hyperdiploidie (2, 7, 8, 12, 13, 17, 18, 19) hypodiploidie - monosomie: 10, 14, 15, 16

  25. Ewingův sarkom t(11;22)(q24;q12) FLI 1/EWSR 1 90% ESWR 1 22q12 t(21;22)(q21;q12) ERG /EWSR 1 t(7;22)(p22;q12) ETV1/EWSR 1 t(17;22)(q12;q12) E1AF/EWSR 1 stanovení mol. gen.metodami maligní melanom t(12;22)

  26. Maligní lymfomy NHL x HL, heterogenní skupina NHL - chromos. změny až 90%, nevznikají fuzní geny, mění se exprese protoonkogenů del13q14 RB1 tumor-supresor t(11;14) Mantle cell lymfom 11q13 gen BCL-1 t(8;14), t(8;22), t(2;8) Burkit.ly. 8q24 c-myc přestavba 18q21(BCL-2) nejčastější t(14;18) folikulární ly. 3q27(BCL-6) t(3;14), t(3;22), t(3;4), t(3;6) anaplastický velkobuněčný u dětí t(2;5) 30-50%

  27. Hodgkinův lymfom Nízká úspěšnost kultivace, nízká frekvence mitoz cyto: nálezy cytogenetických změn variabilní 20 - 80% hyperdiploidie strukturní změny: • 1p, 1q, 2q, 6q, 11p, 11q, 14q • změny komplexní, prognoza nepříznivá

  28. Závěr Specifické nálezy a metody jejich detekce: Typické geny - mol. gen. metody onkogeny, tumor supresorové geny typické chromoz. aberace - cytogenetika fuzní geny(chimerické proteiny), poziční efekt-aktivace protoonkogenů sekundární změny - cytogenetika (komplexní změny, kryptické translokace)

More Related